Definiție
ELISA este un test imunoenzimatic de laborator care detectează și cuantifică prezența unei anumite molecule țintă (de obicei proteine) dintr-o probă biologică (sânge, urină, salivă, țesut, etc.).
Principii de funcționare
ELISA se bazează pe interacțiuni foarte specifice dintre antigene și anticorpi, fiind folosit în multiple variante:
- Antigen „prins” pe suport: Un anticorp specific pentru ținta dorită e fixat pe o suprafață (de obicei godeurile unei plăci).
- Adăugarea probei: Se aplică proba care poate conține molecula căutată (antigenul). Dacă aceasta există, se leagă de anticorpul fixat anterior.
- Anticorp de detecție: Se adaugă un al doilea anticorp, care țintește de asemenea molecula căutată, dar pe o altă porțiune. Acest anticorp e cuplat cu o enzimă.
- Reacție enzimatică: Se adaugă substratul enzimei, care-și schimbă culoarea la activare. Intensitatea culorii e proporțională cu cantitatea de molecule legate.
Tipuri de ELISA
- Direct: Antigenul se leagă direct de suport, se aplică un singur anticorp conjugat cu o enzimă.
- Indirect: Cel mai frecvent, folosește 2 anticorpi (primar + secundar conjugat cu o enzimă).
- Sandwich: Anticorpul e fixat pe suport, se aplică antigenul, apoi un al doilea anticorp de detecție conjugat cu o enzimă.
- Competitiv: Proba și antigenul marcat concurează pentru legarea la anticorp.
Utilizări clinice ale ELISA
ELISA are o arie largă de aplicații în diagnosticul medical:
- Diagnosticarea bolilor infecțioase: Detectează anticorpii produși ca răspuns la un agent patogen (ex: HIV, Hepatita B, sifilis) sau chiar antigeni ai patogenului însuși.
- Boli autoimune: Depistarea auto-anticorpilor (anticorpi ce atacă structuri proprii din organism).
- Niveluri hormonale: Măsoară cantitativ diferiți hormoni din sânge
- Alergii: Identificarea alergenilor declanșatori.
- Teste de sarcină: Detectează în urină hormonul produs de placentă (hCG)
- Cercetare și industria alimentară: Multe alte întrebuințări
Avantaje
- Mare sensibilitate și specificitate
- Versatil (detectează diferite tipuri de molecule-țintă)
- Cantitativ (măsoară concentrația țintei)
- Relativ rapid și ușor de efectuat
- Se poate automatiza pentru analize multiple